smok

smok สารสกัดควันของบุหรี่ (CSE) ทำขึ้นจากที่ชี้แจง

smok

การเตรียมสารสกัดจากควัน smok จากบุหรี่
สารสกัดควันของบุหรี่ (CSE) ทำขึ้นจากที่ชี้แจงไว้ก่อนหน้านี้ที่ผ่านมา 7 อย่างสังเขป ยาสูบศึกษาค้นคว้า 3R4F ในเมืองเคนตักกี้ (University of Kentucky, Kentucky, USA) ถูกเพิ่มฟองผ่านของกินเลี้ยงเชื้อ RPMI-1640 ที่เสริมด้วย 2 mM L-glutamine, 100 U/mL penicillin และก็ 100 μg/mL streptomycin โดยใช้ Watson-Marlow 520R peristaltic ปั๊ม. หลังจากนั้นก็เลยเพิ่มเติม FCS 10 % แล้วก็ CSE ถูกกรองโดยใช้ตัวกรอง 0.22 ไมครอนที่ขับเคลื่อนด้วยหลอดฉีดยา ต่อจากนั้น CSE ถูกปรับไปยัง OD ที่อยากโดยใช้ของกินเลี้ยงเชื้อ

การแยกนิวโทรฟิลรวม smok ทั้งการเพาะเลี้ยง
นิวโทรฟิลถูกแยกออกมาจากเลือดส่วนปลาย ผสมเลือดครบส่วนกับเดกซ์แทรน 4% (สิกข์มา-อัลดริช) ในน้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต (PBS) 1 × แล้วก็ PBS ในอัตราส่วน 2:1:1 แล้วก็เซลล์เม็ดเลือดแดงถูกปลดปล่อยให้นอนก้นบนน้ำแข็งตรงเวลา 30 นาที ส่วนลอยเหนือขี้ตะกอนที่เหลือจะถูกลบออก วางทับ Ficoll-Paque (GE Healthcare, Buckinghamshire, UK) แล้วก็ปั่นแยก (400 กรัมตรงเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิปกติ) เซลล์เม็ดเลือดแดงที่เหลือถูกสลายโดยการเติมน้ำระดับโมเลกุลที่ไม่มีเชื้อ (Sigma-Aldrich) แล้วก็สารแขวนลอยถูกยับยั้งโดยการเติม PBS ต่อจากนั้น สารแขวนลอยถูกล้าง (400  กรัมตรงเวลา 10 นาทีที่ 4 °C) และก็ปริมาณมึงรนูโลไซต์ถูกประเมินโดยการละเว้นทริปแพนบลู มึงรนูโลไซต์ถูกยับยั้งอีกรอบที่ความหนาแน่น 1 × 10 6ต่อมิลลิลิตรในสื่อเสริม RPMI-1640 ความบริสุทธิ์ของการเตรียมนิวโทรฟิลอยู่ที่ราว 95 % (การันตีโดยการย้อมสี Rapi-diff ดังที่ชี้แจงไว้ที่ผ่านมา 32 ) การเตรียม Cytospin ถูกทำให้แห้งกลางอากาศ ปรับปรุงด้วยเมทานอลตรงเวลาสิบนาที รวมทั้งย้อมด้วย Rapi-diff ตามคำแนะนำของผู้สร้าง (Triangle, Skelmersdale, UK) นับรวม 200 เซลล์ต่อสไลด์และก็คำนวณรูปทรงของนิวโทรฟิล

การเตรียมสารสกัดจากควัน smok จากบุหรี่สารสกัดควันของบุหรี่ (CSE) ทำขึ้นจากที่ชี้แจงไว้ก่อนหน้านี้ที่ผ่านมา 7 อย่างสังเขป ยาสูบศึกษาค้นคว้า 3R4F ในเมืองเคนตักกี้ (University of Kentucky, Kentucky, USA) ถูกเพิ่มฟองผ่านของกินเลี้ยงเชื้อ RPMI-1640 ที่เสริมด้วย 2 mM L-glutamine, 100 U/mL penicillin และก็ 100 μg/mL streptomycin โดยใช้ Watson-Marlow 520R peristaltic ปั๊ม. หลังจากนั้นก็เลยเพิ่มเติม FCS 10 % แล้วก็ CSE ถูกกรองโดยใช้ตัวกรอง 0.22 ไมครอนที่ขับเคลื่อนด้วยหลอดฉีดยา ต่อจากนั้น CSE ถูกปรับไปยัง OD ที่อยากโดยใช้ของกินเลี้ยงเชื้อ การแยกนิวโทรฟิลรวม smok ทั้งการเพาะเลี้ยงนิวโทรฟิลถูกแยกออกมาจากเลือดส่วนปลาย ผสมเลือดครบส่วนกับเดกซ์แทรน 4% (สิกข์มา-อัลดริช) ในน้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต (PBS) 1 × แล้วก็ PBS ในอัตราส่วน 2:1:1 แล้วก็เซลล์เม็ดเลือดแดงถูกปลดปล่อยให้นอนก้นบนน้ำแข็งตรงเวลา 30 นาที ส่วนลอยเหนือขี้ตะกอนที่เหลือจะถูกลบออก วางทับ Ficoll-Paque (GE Healthcare, Buckinghamshire, UK) แล้วก็ปั่นแยก (400 กรัมตรงเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิปกติ) เซลล์เม็ดเลือดแดงที่เหลือถูกสลายโดยการเติมน้ำระดับโมเลกุลที่ไม่มีเชื้อ (Sigma-Aldrich) แล้วก็สารแขวนลอยถูกยับยั้งโดยการเติม PBS ต่อจากนั้น สารแขวนลอยถูกล้าง (400  กรัมตรงเวลา 10 นาทีที่ 4 °C) และก็ปริมาณมึงรนูโลไซต์ถูกประเมินโดยการละเว้นทริปแพนบลู มึงรนูโลไซต์ถูกยับยั้งอีกรอบที่ความหนาแน่น 1 × 10 6ต่อมิลลิลิตรในสื่อเสริม RPMI-1640 ความบริสุทธิ์ของการเตรียมนิวโทรฟิลอยู่ที่ราว 95 % (การันตีโดยการย้อมสี Rapi-diff ดังที่ชี้แจงไว้ที่ผ่านมา 32 ) การเตรียม Cytospin ถูกทำให้แห้งกลางอากาศ ปรับปรุงด้วยเมทานอลตรงเวลาสิบนาที รวมทั้งย้อมด้วย Rapi-diff ตามคำแนะนำของผู้สร้าง (Triangle, Skelmersdale, UK) นับรวม 200 เซลล์ต่อสไลด์และก็คำนวณรูปทรงของนิวโทรฟิล